NOTAS PRÉVIAS

Monitoreo molecular de staphylococcus aureus en lesiones crónicas: estudio descriptivo

Bruna Maiara Ferreira Barreto¹, Fernanda Soares Pessanha¹, Beatriz Guitton Renaud Baptista de Oliveira¹,Geraldo Renato de Paula¹, Lenise Arneiro Teixeira¹, Ana Clara Silveira Marques¹

¹Universidad Federal Fluminense

RESUMEN
La presencia de infección en heridas ralentiza el proceso de cicatrización. Los principales microrganismos aislados son Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa.
Objetivo: analizar el perfil fenotípico y genotípico de cepas de Staphylococcus aureus en lesiones crónicas de pacientes ambulatoriales tratadas con hidrogel a 2% o poliuretano. Tal análisis dará subsídios para la decisión del tratamiento adecuado y mayor rapidez en el proceso de reparo tecidual.
Método: Pesquisa descriptiva con enfoque cuantitativo, por medio de la colecta de espécimen clínico de las lesiones por swab con cultura bacteriana, identificación y caracterización molecular.
Descriptores: Úlcera; Infección de la Herida; Staphylococcus Aureus; Enfermería.

SITUACIÓN PROBLEMA Y SIGNIFICANCIA

El S. aureus es uno de los microrganismos más prevalentes en lesiones⁽¹⁾. No obtante, la identificación del agente etiológico sólo por señales y síntomas clínicos es difícil debido a la gran cantidad de microorganismos que pueden ser aislados en culturas⁽¹⁾. La utilización de métodos fenotípicos y, principalmente, genotípicos para determinar la presencia microbiana y evaluar el perfil de suscetibilidad la antimicrobianos y gérmenes de virulencia en bacterias presentes en heridas crónicas permite nortear un tratamiento adecuado.

HIPÓTESIS

Los Staphylococcus aureus presentes en las heridas crónicas presentan diferentes perfiles de resistencia antimicrobiana.

OBJETIVOS

Objetivo general: analizar el perfil fenotípico y genotípico de cepas de Staphylococcus aureus en lesiones crónicas de pacientes ambulatoriales tratadas con hidrogel a 2% o placa de poliuretano. Objetivos específicos: identificar cepas de S. aureus en las lesiones crónicas utilizando métodos fenotípicos y genotípicos; determinar la suscetibilidad de esos microrganismos a los antimicrobianos y biocidas comumente utilizados; detectar la presencia de los genes mecA y pyl utilizando PCR (reacción en cadena de la polimerase); verificar la diversidad genética de las cepas detectadas por medio del PFGE (Pulsed Field Gel Electrophoresis); evaluar la influencia del hidrogel a 2% o poliuretano en las lesiones de los pacientes colonizados, contaminados o infectados con S. aureus.

MÉTODO

Pesquisa descriptiva, con enfoque cuantitativo, realizada en el Ambulatorio de Reparo de Heridas del Hospital Universitario Antônio Pedro (HUAP/UFF) y Policlínica Comunitaria de  Artilugio.  La población atendida en la clínica es de 186 pacientes por año⁽²⁾. La muestra será determinada por conveniencia, con 70 pacientes o cuatro meses de colecta (noviembre de 2014 a febrero de 2015), lo que fuese alcanzado primero.  Criterios de inclusión: edad  de más de 18 años; presentar lesión tisular crónica; usar hidrogel a 2% o poliuretano en la lesión. Criterios de exclusión: presentar lesión(es) crónica(s) con área menor que 3cm2 o con sólo necrosis en la cama; usar medicamentos inmunosupresores. Criterio de descontinuidad: cambio de producto durante los 15 días entre las colectas del primero y de segundo swab.

La colecta de datos es obtenida en dos consultas de enfermería (D0 y D15), con registro de los datos de los pacientes: identificación, clínicos, descriptivos de la lesión, cálculo del  área de la herida por planimetria y fotografia. El análisis microbiológico será realizado en el Laboratorio de Control Microbiológico (LCM) de la Facultad de Farmacia y ocurrirá por medio de la siembra del swab en Manitol Salgado (Difco). Después de la incubación, colonias sugestivas de S. aureus serán sometidas a los test de coloración de Gram, catalase, coagulase, test de disco difusión y de la determinación de la concentración mínima inhibitoria conforme Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI).

La evaluación de genes ocurrirá por PCR. Los amplicones serán sometidos a la electroforesis en gel de agarosa 1,5%, pintados con brometo de etídio y visualizados sobre la luz ultravioleta. Para evaluación de la diversidad clonal de las cepas encontradas será realizado el PFGE utilizando el sistema CHEF-DR III.

El análisis estadístico será en etapas. Primera etapa: tabulación de los datos clínicos de las heridas en planillas en el software Microsoft Excel (Número de série KGFVY-7733B-8WCK9-KTG64-BC7D8); evaluación de la normalidad por el test de Shapiro-Wilk (muestra menor que 50 individuos) o Kolmogorov-Smirnov (muestra mayor que 50 individuos) y análisis por estadística descriptiva en el software BioStat 5.3 (licencia de uso gratis). Segunda etapa: correlaciones de la carga microbiana usando Pearson (datos normales) o Spearman (datos no normales); resistencia la antimicrobianos; genes determinantes de esa resistencia. Nível de significancia de 0,05.

Para analizar  diferentes cepas de S. aureus infectan o colonizan la misma herida, se realizó un pre-test con ensayos de amplificación polimórfica DNA-PCR (RAPD-PCR) con primer 1254 (5’-CCGCAGCCAA-3’) de diferentes colonias a partir del aislamiento bacteriano de un mismo paciente. Los productos fueron analizados por corrida electroforética en gel de agarosis a 1,5% (70V por 2h) para dos muestras determinadas por conveniencia (cinco diferentes colonias obtenidas a partir del aislamiento primario de dos pacientes - Fig 1). Por medio de este análisis, observamos que 75% de las colonias aisladas del paciente 1 presentaron el mismo perfil genético, sugeriendo tratarse de un único clone. En la colonia 1.1 no hubo amplificación, probablemente debido a la falla en la obtención del DNA de la muestra. En el paciente 5, los perfiles genéticos son semejantes en 60% de los casos. Así, se cree que el aislamiento e identificación de sólo una única colonia será representativo de la población de S. aureus de la lesión.

Figura 1: Resultado de la corrida eletroforética. Niterói, 2015.

CITAS

1. Martins MA, Tipple AFV, Reis C, Santiago SB, Bachion MM. Úlcera crônica de perna de pacientes em tratamento ambulatorial: análise microbiológica e de suscetibilidade antimicrobiana.Cienc Cuid Saude (Online) [ Internet ]. 2010 [ cited 2015 Jan 19 ] 9(3). Available:.  http://periodicos.uem.br/ojs/index.php/CiencCuidSaude/article/viewFile/8178/6635

2. Oliveira BGRB, Castro JBA, Granjeiro JM. Panorama epidemiológico e clínico de pacientes com feridas crônicas tratados em ambulatório. Rev enferm UERJ (Online) [ internet ]. 2013 [ cited 2015 Jan 20 ] 21(1). Available from: file:///C:/Users/Win/Downloads/10035-34730-1-PB.pdf

3. Silva PV, Cruz RS, Keim LS, Paula GS, Carvalho BTF, Coelho LR, Carvalho MCS, Rosa JMC, Figueiredo MAS, Teixeira LA. The antimicrobial susceptibility, biofilm formation and genotypic profiles of Staphylococcus haemolyticus from bloodstream infections. Mem Inst Oswaldo Cruz (Online) [ Internet ]. 2013 (Cited 2015 Jan 20) (108)6. Available from:.http://www.scielo.br/pdf/mioc/v108n6/0074-0276-mioc-108-06-0812.pdf

Detalles del Proyecto: Proyecto de Disertación de la Mestría Académica en Ciencias del Cuidado en Salud – UFF
Orientadora: Profª Drª Beatriz Guitton Renaud Baptista de Oliveira
Co-orientadora: Prof Drª Lenise Arneiro Teixeira
Aprobación en el Comité de Ética en Pesquisa: CAAE 33740214.2.0000.5243. Parecer de aprobación: 815.353, 03/10/2014.
Apoyo financiero: Consejo Nacional de Desarrollo Científico y Tecnológico (CNPq).

Todos los autores participaron de las fases de esa publicación en una o más etapas a continuación de acuerdo con las recomendaciones del International Committe of Medical Journal Editors (ICMJE, 2013): (a) participación substancial en la concepción o confección del manuscrito o de la recolecta, análisis o interpretación de los datos; (b) elaboración del trabajo o realización de la revisión crítica del contenido intelectual; (c) aprobación de la versión sometida. Todos los autores declaran para los debidos fines que es de su responsabilidad el contenido relacionado con todos los aspectos del manuscrito sometido al OBJN. Garantizan que las cuestiones relacionadas con la exactitud o integridad de cualquier parte del artículo fueron debidamente investigadas y resueltas. Eximiendo por lo tanto el OBJN de cualquier participación solidaria en eventuales procesos judiciales sobre la materia en aprecio. Todos los autores declaran que no poseen conflicto de intereses, de orden financiera o de relacionamiento, que influencie la redacción y/o interpretación de los resultados. Esa declaración fue firmada digitalmente por todos los autores conforme recomendación del ICMJE cuyo modelo está disponible en http://www.objnursing.uff.br/normas/DUDE_final_13-06-2013.pdf

Recibido: 28-11-2014
Revisado: 26-02-2015
Aprobado: 26-02-2015